您好,今天帅帅来为大家解答以上的问题。qpcr引物设计与pcr区别，qpcr引物设计相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！
1、设计引物原则（1）引物最好在模板cDNA的保守区内设计；（2）引物长度一般在15~30碱基之间，过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应；（3）引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。
2、引物的Tm值是寡核苷酸的解链温度，一般计算公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值；（4）引物自身及引物之间不应存在互补序列。
3、引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构使引物本身复性；（5）引物应具有特异性。
4、引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。
5、如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了；（6）引物扩增长度：一般RT-PCR引物扩增长度在100-200bp,常规PCR扩增长度建议200-500bp。
6、一般PCR产物达到2-3k长度也是可以的，但要考虑到可能引入突变，因此建议使用高保真的聚合酶。
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